Các bước nuôi cấy tế bào và biện pháp phòng ngừa

1 - Phục hồi

●1. Lấy cryovial ra khỏi nitơ lỏng, ngay lập tức cho vào bể nước 37 độ và lắc nhẹ. Sau khi chất lỏng tan chảy (khoảng 1-1,5 phút), hãy lấy nó ra và xịt một ít cồn rồi đặt lên bàn làm việc siêu sạch.

●2. Hút huyền dịch tế bào ở trên cho vào ống ly tâm 15ml chứa đầy 10ml môi trường (rửa ống bảo quản lạnh bằng môi trường để rửa sạch tất cả tế bào bám trên thành ống), ly tâm 1000 vòng/phút trong 5 phút.

●3. Đổ bỏ phần nổi phía trên và thêm 1ml môi trường để tạo huyền phù tế bào. Hút vào đĩa petri 10cm chứa 10ml môi trường nuôi cấy và lắc nhẹ qua lại để tế bào trong đĩa petri phân bố đều.

●4. Dán nhãn loại và ngày tháng của tế bào, tên của người nuôi cấy, v.v., và đặt nó vào tủ ấm CO2 để nuôi cấy. Sau khi các tế bào dính vào tường, thay đổi môi trường.

●5. Thay môi trường 3 ngày một lần.

2. Đi qua

●1. Chuyển đoạn khi mật độ tế bào trong đĩa nuôi cấy đạt 80 phần trăm -90 phần trăm .

●2. Hút môi trường ban đầu.

●3. Thêm trypsin thích hợp (vừa đủ để bao phủ các ô) và tiêu hóa trong 1-2 phút.

●4. Sau khi các tế bào được làm tròn, thêm một thể tích tương đương môi trường chứa huyết thanh để kết thúc quá trình phân hủy.

●5. Sử dụng pipet để đình chỉ các tế bào bằng pipet.

●6. Hút tế bào cho vào ống ly tâm 15ml và ly tâm 1000 vòng/phút trong 5 phút.

●7. Đổ bỏ phần nổi phía trên, thêm 1-2ml môi trường và thổi phồng tế bào.

●8. Chuyển các tế bào vào một số đĩa tùy thuộc vào loại tế bào. Nói chung, có 5 tế bào ung thư và 3 tế bào bình thường. Tiếp tục tu luyện.

3. Bảo quản lạnh Phá hủy tế bào và ly tâm (sđd.). Đình chỉ các tế bào với dung dịch đông lạnh đã chuẩn bị và phân phối chúng vào các hộp lạnh đã khử trùng, để yên trong vài phút và cho biết loại tế bào và ngày bảo quản lạnh. 4 độ trong 30 phút, -20 độ trong 30 phút, -80 độ qua đêm, sau đó được đặt trong nitơ lỏng để bảo quản. Chuẩn bị dung dịch bảo quản lạnh: 70 phần trăm môi trường hoàn chỉnh cộng với 20 phần trăm FBS cộng với 10 phần trăm DMSO. DMSO nên được thêm từ từ từng giọt, lắc trong khi nhỏ giọt.