Đối với các đĩa petri đáy thủy tinh phổ biến trên thị trường, đáy đĩa petri nhựa thường khoét một lỗ, sau đó dán một tấm kính đậy hoặc lam tế bào có độ dày 170-220 μm vào đáy đĩa petri. đĩa petri bằng keo không bóng hoặc silica gel. Không phải toàn bộ đáy đĩa petri được làm bằng thủy tinh. Khu vực thích hợp để quan sát chỉ trong khu vực thủng. Tuy nhiên, do tính kỵ nước của thủy tinh nên khi nuôi cấy tế bào, tế bào không thể bám dính tốt vào thủy tinh, trạng thái sinh trưởng không tốt, thậm chí còn xảy ra hiện tượng tách lớp tế bào trong quá trình chụp ảnh quét đồng tiêu.
Để các tế bào bám dính tốt, cần xác nhận rằng các thuốc thử protein cụ thể đã được phủ trước khi sử dụng các đĩa đáy thủy tinh để nuôi cấy tế bào.
chăn tự làm
Nuôi cấy tế bào khác nhau yêu cầu thuốc thử lớp phủ khác nhau. Đồng thời, do protein dùng để phủ là sản phẩm sinh học nên độ tinh khiết của sản phẩm và liều lượng của protein phủ của các công ty khác nhau là khác nhau. Bài kỹ thuật này chỉ mang tính chất tham khảo. Liều lượng cụ thể của thuốc thử lớp phủ nên tham khảo hướng dẫn của nhãn hiệu được sử dụng. . Và tốt nhất bạn nên thực hiện thí nghiệm gradient với thuốc thử bạn sử dụng để tìm ra nồng độ lớp phủ phù hợp nhất.
Đây là một ví dụ về Poly-L-Lysine (PLL, sigma, P4832, 100ug/ml):
Lớp phủ PLL phù hợp với đại đa số các tế bào, đặc biệt đối với việc nuôi cấy tế bào thần kinh trong hệ thống trung tâm. Cần phải làm cho hàm lượng đạm (ug/cm2) trên một đơn vị diện tích đạt lượng mong muốn trong quá trình sử dụng. Lượng lớp phủ được khuyến nghị cho PLL trong ví dụ này là 2 ug/cm2. Cần tính toán lượng protein cần thiết theo diện tích lớp phủ và khối lượng lớp phủ.
Ví dụ: đĩa petri đáy thủy tinh 35mm, diện tích tế bào phát triển là 3,5cm2, diện tích lớp phủ là 4,1cm2, thể tích dung dịch phủ là 400ul thì liều lượng khuyến cáo là 2ug/cm2. Sau đó, 8,2 ug PLL là cần thiết trong một giếng. Nếu chỉ thêm 400 ul dung dịch PLL thì nồng độ của dung dịch PLL là 20,5 ug/ml (khoảng 20 ug/ml). Do đó, dung dịch gốc cần được pha loãng với nước siêu tinh khiết.
Các bước cụ thể:
1. Pha loãng dung dịch gốc PLL với nước siêu tinh khiết theo tỷ lệ 1:5.
2. Thêm 400 ul dung dịch pha loãng PLL vào mỗi đĩa petri đáy thủy tinh 35 mm.
3. Ủ trong 1-2 giờ ở nhiệt độ phòng và hút dung dịch pha loãng PLL.
4. Rửa cẩn thận 3 lần với 2ml dung dịch PBS hoặc môi trường không có huyết thanh, và hút dung dịch rửa.
5. Thêm trực tiếp huyền phù tế bào để nuôi cấy.
phương pháp đánh giá
Do các đặc tính khác nhau của các protein phủ khác nhau, các protein phủ khác nhau được sử dụng theo những cách khác nhau. Nhiễm bẩn mới thường được tạo ra do nhu cầu tráng các món ăn có đáy bằng thủy tinh. Hơn nữa, sự nhiễm bẩn thường được phát hiện sau khi các ô được nâng lên, điều này không chỉ làm chậm thời gian mà còn gây lãng phí vật tư tiêu hao của bộ. Rốt cuộc, thuốc thử protein tráng và đĩa đáy thủy tinh đảm bảo chất lượng rất đắt tiền (đĩa đáy thủy tinh kém chất lượng có thể bị rò rỉ do keo không dính hoặc keo được sử dụng gây độc cho tế bào).
Đĩa Petri tiêu điểm không có lớp phủ
Đối với những trẻ muốn tiết kiệm thời gian và công sức, sẽ thuận tiện hơn khi sử dụng các đĩa nuôi cấy đồng tiêu không có lớp phủ.
Các yếu tố cần xem xét khi lựa chọn đĩa nuôi cấy phù hợp là: liệu nó có phù hợp để các tế bào của bạn bám dính hay không, liệu các đặc tính quang học của đĩa nuôi cấy có đáp ứng các yêu cầu về tiêu điểm hay không.
Đĩa Petri đáp ứng yêu cầu của các yếu tố trên không chỉ giới hạn ở đĩa đáy bằng thủy tinh tráng. Trên thực tế, mọi người đều biết rằng bát đĩa bằng nhựa rẻ hơn và dễ bám dính tế bào hơn so với thủy tinh. Dưới đây là một ví dụ về đĩa nuôi cấy đồng tiêu từ Shanghai Jingan, để nói về các thông số mà một đĩa nuôi cấy phù hợp với các thí nghiệm đồng tiêu cần phải có:
Có thể thấy rằng các thông số vật lý của đĩa nuôi cấy đồng tiêu đáp ứng yêu cầu sử dụng trực tiếp rất gần với thủy tinh, nhưng đồng thời chúng cũng có đặc tính ưa nước, có thể khiến hầu hết các tế bào bám dính tốt hơn; và độ dẻo tốt hơn thủy tinh. Nó cho phép hầu hết các dòng tế bào và tế bào sơ cấp bám trực tiếp vào tường và không dễ vỡ, đây là một lựa chọn tốt.
Bạn cũng có thể tìm thấy đĩa nuôi cấy đồng tiêu phù hợp nhất cho thí nghiệm của mình theo các yêu cầu thí nghiệm cụ thể và các thông số trong bảng trên.
phương pháp đánh giá
Việc chọn loại đĩa petri này không yêu cầu lớp phủ bổ sung, giúp giảm đáng kể nguy cơ nhiễm bẩn. Và vì đáy nhựa dễ thao tác hơn nên không cần dùng keo để cố định nó vào đáy đĩa petri. Loại bỏ khả năng rò rỉ hoặc gây độc tế bào.
