Đĩa nuôi cấy tế bào là vật tư tiêu hao phổ biến và quan trọng trong các thí nghiệm nuôi cấy tế bào vì có thể tiết kiệm thời gian và nguyên liệu thuốc thử cho thí nghiệm tế bào, đồng thời có thể thiết lập nhiều biến động cùng lúc để thuận tiện cho việc quan sát và phát hiện.
tấm văn hóa
1. Nắp của 96, 24-đĩa nuôi cấy giếng hoặc đĩa petri rất lỏng lẻo, thuận tiện cho việc thông gió, nhưng liệu vi khuẩn, nấm mốc và các chất ô nhiễm khác có lọt vào không?
Trả lời: (1) Vỏ rất lỏng lẻo và thuộc về môi trường bán mở. Mục đích của việc này là để hô hấp (thực chất là để CO2 bên ngoài đĩa nuôi cấy được trao đổi hoàn toàn với đĩa nuôi cấy để duy trì giá trị pH của môi trường).
(2) Có những ưu điểm và nhược điểm, làm tăng khả năng gây ô nhiễm. Ngoài ra, điều này làm cho chất lỏng trong đĩa petri bay hơi, điều này đáng chú ý đối với việc định lượng thuốc chính xác. Vì vậy hai biện pháp sau đây là cần thiết:
a) Không khí trong tủ ấm phải sạch (đèn cực tím thường xuyên, cồn tẩy rửa và bật và tắt tủ ấm càng ít càng tốt)
b) Độ ẩm trong tủ ấm phải luôn được duy trì ở mức 100 phần trăm (một bồn chứa nước cất vô trùng được đặt trong tủ ấm). Hãy chú ý đến hoạt động vô trùng!
2. Các tế bào của tôi được cấy trên đĩa nuôi cấy và các tế bào luôn tập trung ở phần ngoại vi. Tôi nên làm gì? Tôi thấy rằng các tế bào của một số đồng chí trong vũ khí được tập trung ở giữa. Đó có phải là một vấn đề với chất lượng của tấm?
A: Làm thế nào để bạn trộn các tế bào của bạn? Nó có thổi pipet hoặc lắc đĩa nuôi cấy không? Nếu là cái sau và bị lắc theo hình tròn, rất có thể các ô sẽ bị văng ra phần xung quanh do lực ly tâm, dẫn đến lọt vào giữa các ô. Ít hơn, hơn bốn tuần! Bạn có thể thử nó cho mình!
Cách hay: trước khi cấy đĩa giống, bạn cho đĩa cấy vào tủ ấm vài giờ cho bão hòa rồi lấy ra. Khi gieo các ô, lực nên nhẹ. Bạn có thể sử dụng ống nhỏ giọt ở bên cạnh lỗ của đĩa nuôi cấy Thêm từ từ để dịch huyền phù tế bào chảy vào các giếng của đĩa và các tế bào nuôi cấy phát triển đồng đều về cơ bản. Hãy nhớ đừng bao giờ lắc bộ tạo dao động nếu không các tế bào của bạn sẽ kết lại với nhau như bạn đã nói.
3. Các tế bào của tôi được truyền bình thường, nhưng khi một loại đi vào đĩa sáu giếng (bất kể việc bổ sung và kiểm soát thuốc), luôn có hai hoặc ba giếng (ngẫu nhiên) tế bào không phát triển tốt, nhỏ và có vẻ như bị phá vỡ. Có ai gặp phải điều này? Lý do là gì?
Trả lời: Nó có thể liên quan đến nhiệt độ của chất lỏng bạn thêm vào. Nếu tế bào của bạn vừa được lấy ra để thay môi trường và thêm môi trường, đồng thời môi trường cũng được lấy ra khỏi tủ lạnh 4 độ sớm thì tế bào rất dễ bị đông chết. Tốt nhất bạn nên ủ môi trường trong tủ ấm trong 15 phút trước.
Ngoài ra, nó cũng liên quan đến trạng thái tăng trưởng của các tế bào của bạn. Các tế bào trước khi định lượng có thể được ủ với nồng độ cao trong huyết thanh. Hãy chắc chắn rằng các tế bào đang ở trong tình trạng tốt.
Hoặc nó có thể được ủ trong bể nước 37-độ, hoặc bản thân đĩa nuôi cấy có vấn đề, bạn có thể thử một đĩa nuôi cấy khác. Một khả năng khác là vấn đề trạng thái tế bào, hãy điều chỉnh nồng độ huyết thanh khi cấy đĩa.
4. Trong những ngày gần đây, tôi đã sử dụng đĩa nuôi cấy sáu giếng để cấy tế bào. Sau khi nuôi cấy trong 24 giờ, tôi thay đổi môi trường. Trước khi thay đổi môi trường, tôi quan sát thấy rằng các tế bào bám chặt vào thành và trạng thái rất tốt. Sau khi thay đổi môi trường, tôi sử dụng kính hiển vi ngay lập tức. Người ta quan sát thấy rằng gần một nửa số tế bào trong mỗi giếng cho thấy trạng thái gần chết. Các tế bào trở nên rất nhỏ và tạo ra nhiều mảnh vụn, trong khi nửa còn lại của các tế bào là bình thường, có một ranh giới giữa các tế bào bất thường và các tế bào bình thường, nửa hình tròn trên là tốt, nửa hình dưới là không tốt, thế nào là cái này? Có chuyện gì vậy?
A: Bạn có thể xem nếu có bất kỳ lý do nào sau đây
Một. Đĩa nuôi cấy không được đặt nằm ngang;
b. Còn môi trường nuôi cấy của bạn thì sao, nếu môi trường nuôi cấy hết hạn tế bào sẽ không bám dính. Hãy thử một phương tiện chuẩn bị mới
c. Nó có thể là vấn đề của tấm. Không có vấn đề gì khi thay đổi đĩa của nhãn hiệu khác hoặc sử dụng chai nuôi cấy.
d. Bạn có để ý đến ảnh hưởng của quạt gió khi thay môi trường, nhất là khi có nhiều đĩa nuôi cấy phải thay rất dễ làm cho tế bào bị co và vỡ do mất gió và nước. Nếu vậy, môi trường nên được thay đổi từng cái một, và đừng ngại lãng phí pipet, hãy chú ý đến hiệu quả của hoạt động!
5. Đã bốn ngày kể từ khi các tế bào được tiêu hóa và cấy vào đĩa giếng 24-và phần giữa của mỗi giếng luôn đầy. Môi trường được rửa bằng PBS mỗi ngày và tình trạng tương tự xảy ra khi môi trường được thay đổi vào ngày hôm sau. Các cạnh rất dài và trung tâm đầy tế bào chết?
Trả lời: Nếu xung quanh tế bào dày đặc và thưa thớt ở giữa thì có khoảng các nguyên nhân sau:
Phương tiện đã được thêm vào quá ít. Chủ yếu là do vấn đề căng chất lỏng.
Có ít nước ở đáy lồng ấp hay không;
Rung lắc sau khi gieo tế bào là quá nhiều. Các tế bào được phân bố xung quanh do lực ly tâm.
Mấu chốt của việc các ô có được phân bổ đồng đều hay không là mỗi loại ô đều có những điểm khác biệt riêng và hoạt động ô của người khác có thể không phù hợp với bạn. Vì vậy, bạn phải tự mình khám phá và tìm ra một bộ quy tắc duy nhất cho các ô của riêng bạn. Bạn có kinh nghiệm sau:
(1) Tất cả các huyền phù tế bào được gieo hạt phải được trộn bằng pipet trước khi gieo hạt.
(2) Theo hồ sơ, thể tích chất lỏng của đĩa giếng 24-là 1ml, trên thực tế, thể tích 1ml là đủ.
(3) Khi cấy, thêm mẫu từ từ và nhớ xoay nhẹ đầu pipet. Không thể thêm mẫu quá nhanh để tránh các tế bào tích tụ tại một điểm thêm mẫu và chú ý thêm mẫu ở các phần khác nhau, tức là trong khi thêm súng di động. Đầu, nhân tạo các tế bào có khuynh hướng phân bố đều. Làm như vậy có tác dụng phân bố đều các ô.
