Phát hiện PCR

Phát hiện PCR

Phản ứng chuỗi polymerase (PCR) sử dụng một đoạn DNA làm khuôn mẫu, và với sự tham gia của DNA polymerase và chất nền nucleotide, DNA được khuếch đại đến một lượng đủ để phân tích cấu trúc và chức năng. Phương pháp PCR phát hiện có ý nghĩa cực kỳ quan trọng trong chẩn đoán nhanh lâm sàng các bệnh truyền nhiễm do vi khuẩn.

Nguyên tắc của PCR được sử dụng để khuếch đại một đoạn DNA nằm giữa hai trình tự đã biết, tương tự như quá trình sao chép của DNA tự nhiên. Phân tử DNA được khuếch đại được sử dụng làm khuôn và một cặp đoạn oligonucleotide bổ sung cho 5' end và 3' end của khuôn mẫu được sử dụng làm mồi. Dưới tác dụng của DNA polymerase sẽ đi theo khuôn mẫu theo cơ chế nhân đôi nửa dự trữ. Kéo dài chuỗi cho đến khi hoàn thành quá trình tổng hợp DNA mới, lặp lại quá trình này, đoạn DNA đích có thể được khuếch đại.

(PCR) là một phương pháp tổng hợp bằng enzym các đoạn DNA cụ thể trong ống nghiệm. Nó bao gồm một số bước biến tính ở nhiệt độ cao, ủ nhiệt độ thấp và kéo dài nhiệt độ thích hợp. Các tính năng như độ nhạy cao, vận hành dễ dàng và tiết kiệm thời gian. Nó có thể được sử dụng không chỉ trong nghiên cứu cơ bản như phân lập gen, nhân bản và phân tích trình tự axit nucleic, mà còn trong chẩn đoán bệnh hoặc bất kỳ nơi nào có DNA và RNA. Phản ứng chuỗi polymerase (Polymerase Chain Reaction, viết tắt là PCR) còn được gọi là nhân bản phân tử không tế bào hoặc công nghệ khuếch đại enzym hướng dẫn mồi trong ống nghiệm DNA cụ thể.

Sự sao chép bán dự trữ của DNA là một cách quan trọng cho quá trình tiến hóa và chuyển hóa sinh học. DNA sợi đôi có thể bị biến tính và tan chảy thành sợi đơn dưới tác dụng của nhiều loại enzym. Với sự tham gia của DNA polymerase và một promoter, DNA mạch kép có thể được sao chép thành hai phân tử giống nhau theo nguyên tắc bắt cặp bổ sung. Trong các thí nghiệm, người ta thấy rằng DNA cũng có thể bị biến tính và tan chảy ở nhiệt độ cao, và nó có thể được biến tính lại thành các sợi kép một lần nữa khi nhiệt độ hạ thấp. Do đó, bằng cách kiểm soát sự biến tính và biến tính của DNA thông qua sự thay đổi nhiệt độ, và thiết kế đoạn mồi làm chất xúc tiến, thêm DNA polymerase và dNTPs có thể hoàn thành quá trình sao chép in vitro của các gen cụ thể.

Điểm đơn giản là sử dụng thiết bị đặc biệt, sử dụng dNTPS, Mg2+, mồi đặc hiệu, DNA polymerase, và hệ thống đệm, thêm mẫu, là mẫu DNA để khuếch đại trong ống nghiệm và thực hiện điện di. Nếu nó có thể được khuếch đại và kích thước của sản phẩm khuếch đại Phù hợp với dải mục tiêu, điều đó có nghĩa là mồi và mẫu là cụ thể, và chỉ số phát hiện là dương tính.

Các phương pháp và bước phát hiện axit nucleic PCR

Thử nghiệm axit nucleic yêu cầu năm bước: lấy mẫu, lưu giữ mẫu, lưu giữ, tách chiết axit nucleic và thử nghiệm trên máy tính.

Phát hiện axit nucleic

Bước đầu tiên là lấy dịch tiết của người và lau hốc mũi hoặc thành sau của hầu, amidan hai bên bằng xét nghiệm mũi hoặc xét nghiệm hầu họng.

Bước thứ hai, nhân viên y tế giữ mẫu, nhúng đầu mẫu thử vào dung dịch bảo quản tế bào, vặn ngay nắp ống sau khi bẻ đuôi.

Phần thứ ba, cho mẫu vào túi kín, giữ lại và gửi đi kiểm tra kịp thời.

Bước thứ tư là gửi mẫu đến phòng thí nghiệm để chiết xuất axit nucleic.

Trong bước thứ năm, dịch chiết được thực hiện phản ứng khuếch đại PCR huỳnh quang.

Cũng cần một số vật tư tiêu hao và dụng cụ

Dụng cụ PCR, Ống PCR, Đầu tip pipet, Đĩa giếng sâu, Bình chứa và thuốc thử được thêm vào