Yêu cầu cơ bản đối với việc lấy mẫu
1. Bệnh phẩm của các ca bệnh nằm viện do nhân viên y tế của bệnh viện nơi nằm viện lấy, bệnh phẩm của các trường hợp tiếp xúc gần do cơ quan kiểm soát bệnh tật, cơ sở y tế được chỉ định tại địa phương thu thập. Khi thu thập mẫu vật, nên thiết lập các khu vực lấy mẫu khác nhau theo các đối tượng thu thập khác nhau. Bệnh nhân sốt đến phòng khám sốt để điều trị và lấy mẫu xét nghiệm. Các cơ sở không có phòng khám sốt cần bố trí khu vực lấy mẫu đặc biệt cho bệnh nhân sốt, lấy mẫu bệnh nhân sốt và các nhóm xét nghiệm khác để tránh giao nhau. sự nhiễm trùng. 2. Những người bị nhiễm bệnh không có triệu chứng, nhân viên nhập cảnh và những người tiếp xúc gần nên lấy gạc mũi họng để xét nghiệm axit nucleic trong quá trình cách ly và quan sát. Hai mẫu tăm bông mũi họng nên được thu thập cùng một lúc khi phân lập được phát hành, và các thuốc thử phát hiện axit nucleic khác nhau nên được sử dụng để thử nghiệm tương ứng. Về nguyên tắc, thử nghiệm thứ cấp được thực hiện bởi các tổ chức thử nghiệm khác nhau. 3. Theo nhu cầu xét nghiệm lâm sàng và xét nghiệm, có thể lấy nhiều mẫu bệnh phẩm trong quá trình nhập viện và cách ly, đồng thời có thể lấy nhiều mẫu bệnh phẩm như đường hô hấp, máu, phân. Nhân viên lấy mẫu phải tuân thủ nghiêm ngặt các quy định kỹ thuật lấy mẫu để lấy mẫu để đảm bảo rằng chất lượng của mẫu thu được đáp ứng các yêu cầu. Đồng thời, họ nên ghi lại thông tin của người khám một cách chi tiết, có thể sử dụng phương pháp quét mã vạch và các phương pháp thông tin khác để thu thập thông tin liên quan. 4. Để sàng lọc quần thể, các ống lấy mẫu phải được xác định theo yêu cầu của thuốc thử được sử dụng để tách chiết và phát hiện axit nucleic, và có thể chọn các ống lấy mẫu có chứa chất bất hoạt vi rút (muối guanidine hoặc chất hoạt động bề mặt, v.v.). Bệnh phẩm dùng để phân lập vi rút phải được đặt trong ống lấy mẫu không chứa chất khử hoạt tính vi rút. 5. Các hạng mục và giám sát môi trường cần dựa trên mục đích giám sát và nhu cầu phòng ngừa và kiểm soát để xác định hạng mục lấy mẫu, vị trí và số lượng, việc lấy mẫu cần tuân thủ nghiêm ngặt các quy cách lấy mẫu.
(4) Các loại mẫu vật thu thập được. Mỗi trường hợp phải lấy bệnh phẩm đường hô hấp cấp (kể cả bệnh phẩm đường hô hấp trên hoặc tiêu bản đường hô hấp dưới). Trong trường hợp nghiêm trọng, bệnh phẩm đường hô hấp dưới phải được lấy trước; Có thể lấy bệnh phẩm phân, bệnh phẩm máu toàn phần, bệnh phẩm huyết thanh và bệnh phẩm phân tùy theo nhu cầu lâm sàng. Tiêu bản nước tiểu. Các bài báo, mẫu vật môi trường được thu thập theo yêu cầu quan trắc.
Loại bệnh phẩm: 1. Bệnh phẩm đường hô hấp trên: bao gồm ngoáy mũi họng, ngoáy họng ... 2. Bệnh phẩm đường hô hấp dưới: đờm ho sâu, dịch rửa phế nang, dịch rửa phế quản, dịch hút đường hô hấp, ... 3. Tiêu bản phân / hậu môn tăm bông: nên thu khoảng 10 gam (cỡ hạt đậu phộng). Nếu không thuận tiện trong việc giữ mẫu phân, có thể lấy mẫu ngoáy hậu môn. 4. Bệnh phẩm: máu chống đông, thể tích lấy là 5ml, nên sử dụng bình hút máu chân không có chứa chất chống đông EDTA để lấy máu. 5. Bệnh phẩm huyết thanh: cố gắng thu thập mẫu huyết thanh kép trong giai đoạn cấp tính và hồi phục. Huyết thanh đầu tiên nên được thu thập càng sớm càng tốt (tốt nhất là trong vòng 7 ngày sau khi phát bệnh), và huyết thanh thứ hai nên được thu thập trong 3 đến 4 tuần sau khi phát bệnh. Thể tích lấy máu là 5ml, nên sử dụng ống lấy máu chân không không có chất chống đông máu. Các mẫu huyết thanh chủ yếu được sử dụng để xác định kháng thể và không phát hiện axit nucleic. 6. Tiêu bản nước tiểu: lấy nước tiểu giữa buổi sáng, thể tích lấy 2 ~ 3ml. 7. Mẫu vật bề mặt: bao gồm thực phẩm dây chuyền lạnh nhập khẩu hoặc hàng hóa nhập khẩu trên bề mặt bao bì bên trong và bên ngoài, cũng như các dụng cụ vận chuyển và bảo quản và các bộ phận khác có thể bị nhiễm bẩn do thu gom vết bẩn. 8. Mẫu nước thải: Theo phân bố hệ thống thoát nước của các khu chế biến, xử lý hàng đông lạnh nhập khẩu quy mô lớn tại cảng biển, tập trung lựa chọn đầu ra thoát nước thải, mạng lưới đường ống nội bộ thu gom, hạ lưu của dòng nước thải hoặc các kết nối với mạng lưới đường ống của thành phố, v.v ... 2 đến 3 điểm Bits được lấy mẫu.
(4) Thu thập và xử lý mẫu vật
1. Gạc ngoáy mũi: người lấy mẫu nhẹ nhàng đỡ đầu người được lấy bằng một tay và giữ tăm bằng tay kia. Miếng gạc đi vào lỗ mũi và từ từ đi sâu theo phần đáy của đường mũi dưới. Vì sống mũi cong nên không thể chấp nhận được. Dùng lực quá mạnh để tránh chảy máu do chấn thương. Khi đầu tăm bông chạm đến thành sau của khoang mũi họng, nhẹ nhàng xoay nó trong một tuần (trong trường hợp ho có phản xạ, hãy giữ lại một lúc), sau đó từ từ lấy tăm bông ra và nhúng đầu tăm bông vào 2 ～ 3ml dung dịch bảo quản virus (cũng có thể là Dùng dung dịch muối đẳng trương, dịch nuôi cấy mô hoặc dung dịch đệm phosphat), loại bỏ đuôi và vặn chặt nắp.
2. Gạc dịch họng: người được lấy mẫu phải súc miệng bằng nước muối sinh lý thông thường, người lấy mẫu phải làm ẩm tăm bông trong nước muối vô trùng (không được để tăm bông trong dung dịch bảo quản vi rút để tránh kháng sinh gây dị ứng), và người được thu vào Hơi nghiêng đầu, mở miệng và phát ra tiếng" ah" âm thanh, bộc lộ amidan cả hai bên, đặt tăm bông ngang gốc lưỡi, dùng lực nhẹ lau amidan hai bên người ít nhất 3 lần, sau đó lau lên xuống họng sau ít nhất. 3 lần. Tiếp theo, nhúng đầu tăm bông vào ống chứa 2 đến 3 ml dung dịch bảo quản virus (có thể dùng dung dịch muối đẳng trương, dịch nuôi cấy mô hoặc dung dịch đệm phosphat), bỏ phần đuôi và vặn chặt nắp ống. Que ngoáy họng cũng có thể được đặt trong cùng một ống với que ngoáy mũi họng.
3. Hút dịch mũi họng hoặc hút dịch đường hô hấp: Dùng ống góp nối với bơm áp suất âm để hút dịch nhầy ở mũi họng hoặc hút dịch tiết đường hô hấp từ khí quản. Đưa đầu của bộ thu vào khoang mũi hoặc khí quản, bật áp suất âm, xoay đầu của bộ thu và từ từ rút ra, thu lấy chất nhầy đã chiết xuất và tráng bộ thu một lần với 3ml chất lỏng lấy mẫu (bạn cũng có thể sử dụng cho trẻ em ống thông kết nối với một ống tiêm 50ml Bộ thu thay thế).
4. Khạc đờm: Sau khi bệnh nhân hết ho, lấy đờm đã ho vào ống lấy mẫu chứa 3ml dịch lấy mẫu. Nếu không lấy được đờm trong dịch lấy mẫu, có thể thêm 2 đến 3ml dịch lấy mẫu trước khi xét nghiệm, hoặc có thể thêm một lượng tương đương nước tiêu hóa đờm. Công thức của dung dịch bảo quản dịch tiêu hóa đờm được trình bày trong Bảng 1.
Khi sử dụng, pha loãng dung dịch bảo quản thành 50ml với nước khử ion, trộn với cùng một thể tích đờm hoặc tham khảo hướng dẫn sử dụng thuốc thử, hoặc sử dụng một thể tích đờm tương đương với đệm phosphat chứa 1g / L proteinase K để chuyển đổi khạc đàm.
5. Dịch rửa phế quản: đưa đầu thu từ lỗ mũi hoặc hốc khí quản vào khí quản (sâu khoảng 30cm), bơm 5ml nước muối sinh lý thường, bật áp suất âm, xoay đầu thu và rút từ từ, lấy dịch nhầy đã hút ra, Và dội một lần dung dịch lấy mẫu vào bộ thu mẫu, hoặc bạn có thể sử dụng ống thông dành cho trẻ em được kết nối với ống tiêm 50ml để thay thế bộ thu mẫu.
6. Dịch rửa phế nang: Sau khi gây tê tại chỗ, đưa ống soi phế quản xơ qua miệng hoặc mũi qua hầu vào phế quản của thùy giữa bên phải hoặc phân thùy phổi trái, và chạm đầu của nó vào lỗ mở nhánh phế quản, và từ từ thêm vào. qua lỗ sinh thiết khí quản. Nước muối sinh lý diệt khuẩn, mỗi lần 30-50ml, tổng 100-250ml, không được quá 300ml.
7. Tiêu bản: Lấy 1ml dung dịch xử lý tiêu bản, lấy tiêu bản có kích thước bằng hạt đậu nành cho vào ống, thổi nhẹ và hút 3 đến 5 lần, để yên ở nhiệt độ phòng 10 phút, ly tâm ở 8000. vòng / phút trong 5 phút, và hấp thụ phần nổi phía trên. Phát hiện. Dung dịch xử lý mẫu phân có thể được tự chuẩn bị và công thức được thể hiện trong Bảng 2.
Dung dịch HANK' S hoặc dung dịch muối đẳng trương khác, dịch nuôi cấy mô hoặc dung dịch đệm phosphat cũng có thể được sử dụng để hòa tan mẫu phân để chuẩn bị huyền phù phân. Nếu bệnh nhân có triệu chứng tiêu chảy, lấy 3 ~ 5ml tiêu bản phân, dùng pipet nhẹ nhàng trộn đều, ly tâm ở tốc độ 8000 vòng / phút trong 5 phút, hút phần nổi phía trên để sử dụng.
8. Tăm bông hậu môn: Dùng tăm bông tiệt trùng nhẹ nhàng đưa vào hậu môn 3 5cm, sau đó xoay nhẹ ra ngoài, cho ngay vào ống lấy mẫu 15ml nắp vặn bên ngoài có chứa 3 ～ 5ml dung dịch bảo quản vi rút, bỏ phần đuôi, và xoay nó. Vặn chặt nắp ống.
9. Tiêu bản máu: Nên sử dụng ống lấy máu chân không có chứa chất chống đông EDTA để lấy bệnh phẩm 5ml. Tùy theo loại thuốc thử chiết xuất axit nucleic đã chọn, sử dụng máu toàn phần hoặc huyết tương để chiết xuất axit nucleic. Để tách huyết tương, ly tâm toàn bộ máu ở tốc độ 1500-2000 vòng / phút trong 10 phút, và thu lấy phần nổi phía trên trong một ống nhựa có đầu vặn vô trùng.
10. Mẫu huyết thanh: Lấy 5ml mẫu máu bằng ống lấy máu áp suất âm chân không, để ở nhiệt độ phòng 30 phút, ly tâm 1500-2000 vòng / phút trong 10 phút, thu huyết thanh vào ống nhựa có nắp vặn vô trùng.
11. Mẫu vật bề mặt: Tham khảo phương pháp được khuyến nghị trong" Đặc điểm kỹ thuật để giám sát môi trường đối với Coronavirus mới trong thị trường thương mại nông sản (Market Trade)" (WS / T776—2021). Sau khi miếng gạc lấy mẫu được thấm hoàn toàn với dung dịch bảo quản vi rút, áp dụng nó lên bề mặt một lần nữa và sau đó áp dụng miếng gạc. Đặt lại vào ống lấy mẫu và ngâm, lấy ra và bôi mẫu lại, lặp lại trên 3 lần. Lấy mẫu phân tán đa điểm được thực hiện trên các đối tượng có bề mặt lớn.
12. Mẫu nước thải: Tham khảo các phương pháp được khuyến nghị trong" Đặc điểm kỹ thuật để giám sát môi trường của Coronavirus mới trong thị trường thương mại nông sản (Market Trade)" (WS / T776—2021). Khi lấy mẫu nước thải bằng tăm bông, hãy nhúng tăm bông vào nước thải đã được hấp phụ và lấy miếng gạc ra. Đặt lại ống lấy mẫu để ngâm, lấy ra và nhúng lại vào nước thải, lặp lại hơn 3 lần và tiến hành lấy mẫu phân tán đa điểm cho từng vị trí lấy mẫu nước thải. Khi lấy mẫu nước thải, sử dụng chai nhựa polyetylen để lấy 1L ～ 1,5L nước thải. Đối với việc thu gom nước thải lớn hơn 1.5L, bạn có thể sử dụng xô nhựa polyetylen hoặc thiết bị làm giàu đặc biệt cho các mẫu nước tại chỗ. Trước khi lấy mẫu nước thải cần trộn kỹ rồi mới lấy mẫu; nếu nước thải khó trộn đều và xảy ra hiện tượng phân tầng thì có thể lấy mẫu theo từng lớp theo tỷ lệ thể tích nước của từng lớp.
13. Các vật liệu khác: thu thập theo yêu cầu và thông số kỹ thuật của thiết kế.
(5) Bao bì mẫu
Sau khi bệnh phẩm được thu thập, được đóng gói lại trong tủ an toàn sinh học của phòng xét nghiệm an toàn sinh học cấp II.
1. Tất cả các mẫu phải được đặt trong ống lấy mẫu có kích thước phù hợp, có nắp vặn và miếng đệm bên trong, có khả năng chống đông và được vặn chặt. Số mẫu, loại, tên và ngày lấy mẫu được ghi ở bên ngoài vật chứa. 2. Cho bệnh phẩm đã niêm phong vào túi kín, mỗi túi giới hạn một bệnh phẩm. Yêu cầu đóng gói mẫu phải đáp ứng các tiêu chuẩn tương ứng của" Quy tắc kỹ thuật về Vận chuyển An toàn Hàng hóa Nguy hiểm bằng Đường hàng không" ;. 3. Khi vận chuyển bệnh phẩm ra bên ngoài, phải đóng gói ba lớp tùy theo loại bệnh phẩm và chất lây nhiễm loại A hoặc loại B.
(6) Bảo quản mẫu vật
Các mẫu vật dùng để phân lập vi rút và phát hiện axit nucleic nên được xét nghiệm càng sớm càng tốt. Các bệnh phẩm có thể được kiểm tra trong vòng 24 giờ có thể được bảo quản ở 4 ° C; Các mẫu vật không thể phát hiện được trong vòng 24 giờ nên được bảo quản ở nhiệt độ -70 ° C hoặc thấp hơn (nếu không - Bảo quản ở 70 ° C trong tủ lạnh ở -20 ° C). Mẫu huyết thanh có thể được bảo quản ở 4 ° C trong 3 ngày, và có thể bảo quản trong thời gian dài dưới -20 ° C. Thư viện đặc biệt hoặc quầy đặc biệt nên được thiết lập để lưu trữ các mẫu vật riêng biệt.
(7) Gửi các mẫu vật để kiểm tra
Các mẫu bệnh phẩm phải được gửi đến phòng thí nghiệm càng sớm càng tốt sau khi thu thập và không được để bệnh phẩm ở nhiệt độ phòng (25 ° C) trong hơn 4 giờ sau khi lấy. Nếu phải vận chuyển đường dài, nên sử dụng đá khô và các phương pháp làm lạnh khác để bảo quản. Tránh đông lạnh và rã đông lặp đi lặp lại trong quá trình vận chuyển bệnh phẩm.
1. Gửi mẫu vật
Tất cả các ca ban đầu hoặc sớm của các ổ dịch cục bộ được phát hiện ở các tỉnh (khu tự trị, thành phố trực thuộc trung ương), các ca bệnh trọng điểm liên quan đến dịch tễ học của các ca bệnh sớm, các ca bệnh địa phương không rõ nguồn lây, ca bệnh nhập khẩu từ nước ngoài, hàng hóa nhập khẩu và môi trường liên quan các mẫu dương tính, v.v ... Cần lấy ít nhất 2 mẫu song song, một mẫu gửi đến cơ quan kiểm soát dịch bệnh cấp tỉnh để xét nghiệm, mẫu còn lại gửi đến Trung tâm Kiểm soát và Phòng ngừa Dịch bệnh Trung Quốc để xét nghiệm và xem xét, và một bản gửi mẫu. được đính kèm (xem Phụ lục 10-1). Các chủng đại diện mới được phân lập từ các tỉnh khác nhau cần được gửi ngay đến Trung tâm Kiểm soát và Phòng ngừa Dịch bệnh Trung Quốc để xem xét và bảo quản.
2. Vận chuyển mẫu vật và chủng
(1) Việc vận chuyển trong nước các chủng coronavirus mới hoặc các vật liệu sinh học có khả năng lây nhiễm khác được phân loại là Loại A và số UN tương ứng là UN2814. Bao bì tuân theo phân loại PI620 của tài liệu ICAO Doc9284" Hướng dẫn Kỹ thuật Vận chuyển An toàn Hàng hóa Nguy hiểm bằng Đường hàng không" Yêu cầu về đóng gói: Các mẫu môi trường thuộc loại B và số UN tương ứng là UN3373. Bao bì đáp ứng các yêu cầu phân loại PI650 của tài liệu ICAO Doc9284" Quy tắc kỹ thuật cho việc vận chuyển an toàn hàng hóa nguy hiểm bằng đường hàng không" ;; bao bì tiêu chuẩn trên có thể được tham khảo để vận chuyển bằng các phương tiện vận chuyển khác. Việc vận chuyển các chủng coronavirus mới hoặc các vật liệu có khả năng lây nhiễm khác phải được xử lý theo" Quy định hành chính về việc vận chuyển các loài hoặc mẫu có thể lây nhiễm vi sinh vật gây bệnh cao (vi rút) có thể lây nhiễm sang người" (trước đây là Lệnh số 45 của Bộ Y tế) cho" Giấy phép Giao thông Vận tải" .
(2) Vận chuyển quốc tế Các mẫu vật hoặc chủng vi rút coronavirus mới được vận chuyển quốc tế sẽ được đóng gói theo cách thức tiêu chuẩn hóa, trải qua các thủ tục liên quan theo" Quy định về Quản lý Vệ sinh và Kiểm dịch Nhập cảnh và Thoát khỏi các Bài báo Đặc biệt" ;, và đáp ứng các yêu cầu quốc gia và quốc tế có liên quan.
(3) Tiếp nhận và quản lý bệnh phẩm, chủng vi rút. Bệnh phẩm được vận chuyển bằng đường hàng không đến sân bay đích và được vận chuyển bằng phương tiện vận chuyển chuyên nghiệp đến đơn vị tiếp nhận. Các mẫu vật vận chuyển bằng đường bộ được vận chuyển bằng xe chuyên nghiệp. Người vận chuyển và người nhận phải xử lý mẫu vật Ký hiệu hai lần để nhận. Các mẫu vật và chủng vi rút coronavirus mới cần được người chuyên trách quản lý, ghi chép chính xác nguồn gốc, chủng loại, số lượng và đăng ký số hiệu của các mẫu vật và chủng vi rút, thực hiện các biện pháp hữu hiệu để đảm bảo an toàn cho các chủng và mẫu bệnh phẩm, đồng thời ngăn chặn nghiêm ngặt. sử dụng sai mục đích, sử dụng có mục đích xấu, trộm cắp và ăn cắp. Cướp, mất mát, rò rỉ và các sự cố khác.
02
Thử nghiệm trong phòng thí nghiệm về coronavirus mới
